अपरिपक्व बीजांडों (immature ovules) का संवर्धन (culturing) उन मामलों में किया जाता है, जहाँ परागण (pollination) सफल होता है लेकिन असंगति (incompatibility) के कुछ कारणों से, बीज एक निश्चित अवस्था (stage) से आगे विकसित नहीं हो पाते हैं। यह प्रक्रिया तभी सफल हो सकती है जब निषेचन (fertilization) के बाद कम से कम कुछ दिन बीत चुके हों।
इस बात पर निर्भर करते हुए कि भ्रूण (embryo) कब नष्ट (abort) होता है, बीजांडों (ovules) को निषेचन के तुरंत बाद से लेकर लगभग विकसित फलों (fruits) तक किसी भी समय निकालना (excise) पड़ता है, जो कभी-कभी समय से पहले गिरने (premature abscission) के कारण नष्ट हो सकते हैं।
Malvaceae, Fabaceae, Cruciferae, Solanaceae आदि परिवारों (families) के सदस्यों से जुड़ी विभिन्न कठिन अंतर-विशिष्ट/अंतर-वंशीय संकरण (interspecific/intergeneric crosses) के लिए, परिपक्व भ्रूण/बीज (mature embryos/seeds) प्राप्त करने के लिए निषेचन के बाद बीजांडों का सफलतापूर्वक संवर्धन किया गया है।
हालाँकि, बीजांड संवर्धन मुख्य रूप से केवल उन मामलों में ही आजमाया जाता है, जहाँ भ्रूण बहुत जल्दी नष्ट हो जाता है, और भ्रूण संवर्धन (embryo culture) बहुत शुरुआती अवस्था में इसके निष्कर्षण (excision) की कठिनाई के कारण संभव नहीं होता है। कुछ मामलों में, प्रारंभिक विकास (initial growth) को तेज करने के लिए माध्यम (medium) में कुछ फलों/सब्जियों के रस (fruit/vegetable juice) को पूरक (supplement) के रूप में जोड़ने की आवश्यकता हो सकती है।
निमोतो और सागावा (Nimoto and Sagawa, 1961) ऑर्किड (orchids) में इसका प्रयास करने वाले पहले व्यक्ति थे। उनके अनुसार, बीजों (seeds) को परागण के लगभग 55 दिन बाद ही संवर्धन के लिए निकाला जा सकता था। लेकिन इज़राइल (Israel, 1963) रिपोर्ट करते हैं कि उन्होंने परागण के सात दिन बाद अंडाशय (ovaries) से बीज निकाले और उन्हें अंकुर अवस्था (seedling stage) तक संवर्धित किया।
Cypripedium और Paphiopedilum जैसे कुछ वंश (genera) हैं जिनके बीजों का अंकुरण (germination) विशेष रूप से कठिन होता है। ऐसे मामलों में कहा जाता है कि बीज आवरण (seed coat) में कुछ ऐसे पदार्थ होते हैं जो अंकुरण की प्रक्रिया को धीमा (retard) करते हैं या रोकते भी हैं (Northern, 1970)। बीज आवरण पूरी तरह से विकसित होने से पहले बीजांडों का संवर्धन करने से ऐसे मामलों में अंकुरण का प्रतिशत अधिक होगा। अपरिपक्व फली (immature pod) को स्टरलाइज़ (sterilise) किया जाता है, एक स्टराइल चाकू (sterile knife) से काटकर खोला जाता है और बीजों को निकालकर आसुत जल (distilled water) वाली एक शीशी (vial) में डाल दिया जाता है। इसे अच्छी तरह से हिलाया जाता है और बीजों को बीजों के सीधे संपर्क में आने के लिए बोया जाता है। ऐसे मुश्किल से अंकुरित (germinate) होने वाले बीजों से निपटने के लिए अन्य विशेष तकनीकों (techniques) का भी सुझाव दिया गया है। कानो (Kano, 1968) ने बताया कि फ्लास्किंग (flasking) से पहले बीजों को स्टरलाइज़ किए गए पानी (sterilised water) में 5 घंटे तक डुबोने और फ्लास्क को पूरी तरह से सील (seal) करने से Cymbidium virescens और C. gyrokuchin के बीजों के अंकुरण की प्रक्रिया तेज हो गई। इसी तरह Cypripedium acaule (जिसे सामान्य परिस्थितियों में अंकुरित करना बहुत मुश्किल है) के बीजों को 15-45 दिनों के लिए एक स्टराइल पोषक घोल (sterile nutrient solution) में भिगोना और उन्हें बिना हवा वाले फ्लास्क (unaerated flasks) में रखना, अंकुरण को तेज करने वाला बताया गया है। फ्लास्क (Flasks) को अधिमानतः (preferably) 25°C (250C) पर और विसरित प्रकाश (diffuse light) के तहत, एक इनक्यूबेटर (incubator) में या कांच के नीचे एक ग्रीन हाउस (green house) में रखा जाना चाहिए।
बीजांड संवर्धन की प्रक्रिया को दो भागों में विभाजित किया जा सकता है: पहला उस माध्यम की तैयारी है जहाँ बीजांड को संवर्धित (cultured) किया जाएगा और दूसरा बीजांड का वास्तविक संवर्धन (actual culture) है।
संवर्धन माध्यम (culture medium) के घटकों (components) में अकार्बनिक पोषक तत्व (inorganic nutrients) शामिल हैं जो पौधे को अपना जीवन चक्र (life cycle) पूरा करने के लिए आवश्यक हैं, जैसे कि चीनी (sugar), विटामिन (vitamins), अमीनो एसिड (amino acid), नारियल पानी (coconut water) जैसे कार्बनिक पूरक (organic supplement), वृद्धि नियामक (growth regulators), जेलिंग एजेंट (gelling agent) के रूप में अगार (agar), और अन्य पूरक (supplements) जिन्हें आवश्यक माना जाता है। ऑर्किड के मामले में, नुडसन माध्यम (Knudson medium) का उपयोग किया जा रहा है क्योंकि यह विशेष रूप से ऑर्किड के लिए तैयार (formulated) किया गया है。
माध्यम तैयार होने के बाद वास्तविक संवर्धन आगे बढ़ता है। एक एसेप्टिक स्थिति (aseptic condition) प्राप्त करने के लिए, इनोक्यूलेशन चेंबर (inoculation chamber) को उस सतह पर 80 प्रतिशत इथाइल अल्कोहल (ethyl alcohol) का छिड़काव करके कीटाणुरहित (disinfected) किया जाता है जहाँ पूरी प्रक्रिया (process) की जाएगी।
एक ऑर्किड फली (orchid pod) जिसमें ऑर्किड के बीज होते हैं, उसे सुरक्षित किया जाता है और प्रारंभिक नसबंदी (preliminary sterilization) के लिए 95 प्रतिशत इथाइल अल्कोहल के साथ रगड़ा जाता है। चेंबर (chamber) के अंदर, पूरी फली (pod) को स्कैलपेल (scalpel) और चिमटी (forceps) की सहायता से 3 से 5 सेकंड के लिए 95 प्रतिशत इथाइल अल्कोहल से 1/3 भरी बोतल में डुबोया जाएगा। इथाइल अल्कोहल में डुबोए जाने के बाद, फली को कम से कम तीन बार तब तक जलाया (flamed) जाएगा जब तक कि सतह पर मौजूद अल्कोहल (alcohol) वाष्पित (evaporate) न हो जाए। यह सुनिश्चित करने के लिए कि फली की सतह दूषित पदार्थों (contaminants) से मुक्त है, ऐसे चरणों की एक श्रृंखला की जाती है।
सतह के स्टरलाइजेशन (surface sterilization) के बाद, स्टराइल चिमटी (sterile forceps) की सहायता से फली को एक स्टराइल पेट्री डिश (sterile petri dish) पर काटा (sectioned) जाता है। एक बार फली खुलने के बाद, हजारों ऑर्किड बीजांड (orchid ovules) सामने आएंगे। स्कैलपेल का उपयोग करके बीजांडों को फली से सावधानीपूर्वक खुरच (scraped) दिया जाएगा और संवर्धन माध्यम की बोतल में सावधानी से गिरा दिया जाएगा। एक बार जब बीजांड अंदर बैठ (settle) जाते हैं, तो बोतल को कॉटन प्लग (cotton plugs) से कसकर ढक दिया जाएगा और एक ठंडी और अच्छी रोशनी वाली जगह (cool and well-lighted place) पर रखा जाएगा।
ऑर्किड (orchid) के संवर्धन में सफल अंकुरण के संकेत तब मिलते हैं जब ऑर्किड के बीज फूलने (swell) लगते हैं और हरे हो जाते हैं। जल्द ही, भ्रूण बड़ा हो जाता है और एक लट्टू (top) का आकार ले लेता है। इस बिंदु (point) पर, संरचना (structure) अब एक भ्रूण नहीं है, बल्कि एक प्रोटोकोर्म (protocorm) है। इस अवस्था में, प्रोटोकोर्म (protocorms) रिफ्लास्किंग (reflasking) के लिए तैयार होते हैं। एक स्पैटुला (spatula) के उपयोग से प्रोटोकोर्म को एक संवर्धन बोतल (culture bottle) से दूसरी में स्थानांतरित (transferred) किया जाएगा। रिफ्लास्किंग आवश्यक है क्योंकि यह प्रोटोकोर्म के आगे के विकास (growth) और विकास (development) के लिए जगह प्रदान करेगा। रिफ्लास्किंग के चार से आठ महीने बाद, प्रोटोकोर्म बड़े हो जाएंगे और पॉटिंग (potting) के लिए संवर्धन बोतल से बाहर रोपे (planted) जाने के लिए तैयार हो जाएंगे।
किसी भी प्रक्रिया की तरह, इस तकनीक (technique) में माध्यम तैयार करने (media preparation) और संवर्धन (culture) करने में कौशल (skills) और ज्ञान (knowledge) की आवश्यकता होती है, विशेष रूप से भ्रूण के विकास के चरणों (stages of development) पर।
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