1. ग्रो - आउट टेस्ट (Grow - Out Test)
उद्देश्य
अधिसूचित कल्टीवेटर / संकर (notified cultivar / hybrid) के किसी दिए गए बीज लॉट (given seed lot) की आनुवंशिक शुद्धता स्थिति (genetic purity status) का निर्धारण करना और यह पता लगाना कि विचाराधीन नमूना (sample in question) निर्धारित मानकों के किस हद तक (extent to which) अनुरूप है।
प्रयोज्यता का क्षेत्र (Field of applicability)
ग्रो-आउट टेस्ट (Grow-out Test) बीज लॉट (seed lot) की आनुवंशिक शुद्धता (genetic purity) को नियंत्रित (controlling) करने के लिए आधिकारिक उपाय है। यह आनुवंशिक संदूषण (genetic contaminations) से बचने के लिए (for avoiding) एक पूर्व-नियंत्रण (pre-control) के साथ-साथ (as well as) 'पश्चात-नियंत्रण' परीक्षण ('post-control' test) के रूप में कार्य करता है। भारत में आधिकारिक नियमों (official regulations in India) के अनुसार, यह कपास, अरंडी, कस्तूरी तरबूज (musk melon) और बैंगन जैसी कुछ प्रजातियों के संकरों (hybrids of certain species) के बीज प्रमाणीकरण के लिए पूर्व-आवश्यकता (pre-requisite) है।
यह परीक्षण बीज अधिनियम 1966 के प्रावधानों (provisions of the seeds Act 1966) के तहत बीज लॉट की आनुवंशिक शुद्धता स्थिति के संबंध में विक्रेता के लेबल (sellers label) की जांच के लिए आयोजित किया जाना आवश्यक है। इसके अलावा (In addition) ग्रो-आउट टेस्ट का उपयोग प्रमाणन एजेंसी (certification agency) या निरीक्षक (inspector) की प्रभावकारिता (efficacy) को आंकने के उपाय (measure to judge) के रूप में भी किया जा सकता है (can be used)।
नमूनाकरण
'ग्रो-आउट टेस्ट' ('Grow-out test) के लिए नमूने अन्य बीज गुणवत्ता परीक्षणों (other seed quality tests) के लिए नमूनों के साथ निर्धारित नमूनाकरण प्रक्रियाओं के अनुसार (in accordance with) लिए जाएंगे (shall be drawn)।
जमा किए गए नमूने का आकार (Size of submitted sample)
जमा किए गए नमूनों का आकार (size of submitted samples) प्रजातियों के अनुसार (according to the species) अलग-अलग होगा, जैसा कि इस तालिका (this Table) में उदाहरण दिया गया है।
| ग्रो-आउट टेस्ट के लिए जमा किए गए नमूने का अनुशंसित आकार (Recommended size of submitted sample for Grow-out Test) | |
|---|---|
| मक्का (maize), कपास, मूंगफली (groundnut), सोयाबीन (soyabean) और समान आकार के बीजों वाले अन्य जेनेरा की प्रजातियों के लिए (species of other genera with seeds of similar size) | 1,000 ग्राम (1,000 g) |
| ज्वार (sorghum), गेहूं (wheat), धान (paddy) और समान आकार के बीजों वाले अन्य जेनेरा की प्रजातियों के लिए | 500 ग्राम (500 g) |
| बीटा (Beta) और समान आकार के बीजों वाले अन्य जेनेरा की प्रजातियों के लिए | 250 ग्राम (250 g) |
| बाजरा (bajra), जूट (jute) और अन्य सभी जेनेरा की प्रजातियों के लिए (species of all other genera) | 100 ग्राम (100 g) |
| बीज आलू (Seed potato), शकरकंद (sweet potato) और अन्य वानस्पतिक रूप से प्रवर्धित फसलें (other vegetatively propagating crops) | 250 कंद / रोपण स्टेक्स / जड़ें/ कॉर्म (250 tubers / planting stakes / roots/ corms) |
कार्यशील नमूने का आकार (Size of working sample)
ग्रो आउट टेस्ट (grow out test) के लिए कार्यशील नमूना (working sample) बीज नमूनाकरण के लिए निर्धारित प्रक्रिया (prescribed procedure for seed sampling) के अनुसार जमा किए गए नमूने (submitted sample) को बाद में (subsequent) मिलाने (mixing) और विभाजित (dividing) करने के माध्यम से प्राप्त किया जाएगा (shall be obtained)।
टिप्पणियां लेने (taking the observations) के लिए आवश्यक न्यूनतम जनसंख्या (minimum population required) 400 पौधे (400 plants) होगी; हालांकि, यह भारतीय न्यूनतम बीज प्रमाणन मानकों (Indian Minimum seed Certification standards) में विचाराधीन प्रजातियों (species under consideration) के लिए निर्धारित अधिकतम अनुमेय ऑफ-टाइप पौधों (maximum permissible off-type plants prescribed) पर भी निर्भर करेगा (will also depend on)।
आवश्यक संख्या में पौधे प्राप्त करने (to obtain the required number of plants) के लिए फसल उगाने (raising the crop) के लिए आवश्यक बीजों की संख्या (number of seeds required) बीज के नमूने (seed sample) के अंकुरण प्रतिशत (germination percentage) पर निर्भर (depend) करेगी और इसलिए बीज दर (seed rate) को तदनुसार समायोजित (adjusted accordingly) किया जाना चाहिए (should be)।
| ग्रो आउट टेस्ट के लिए प्रति नमूना आवश्यक पौधों की संख्या (Number of plants required per sample for grow out test) | ||
|---|---|---|
| न्यूनतम आनुवंशिक शुद्धता (%) (Minimum genetic Purity (%)) | अधिकतम अनुमेय ऑफ प्रकार (%) (Maximum permissible off types (%)) | प्रति नमूना आवश्यक पौधों की संख्या (Number of plants required per sample) |
| 99.9 | 0.10 | 4,000 |
| 99.8 | 0.20 | 2,000 |
| 99.7 | 0.30 | 1,350 |
| 99.5 | 0.50 | 800 |
| 99.0 और नीचे (99.0 and below) | 1.00 और ऊपर (1.00 and above) | 400 |
प्रक्रियाएं
ग्रो आउट टेस्ट के परिणामों की सटीकता (accuracy) और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता (reproducibility) प्राप्त करने के लिए (To achieve), नीचे दी गई (provided hereunder) प्रक्रियाओं का पालन किया जाना चाहिए (must be followed):
ग्रो आउट टेस्ट का स्थान (Location of the grow out test)
ग्रो आउट टेस्ट कल्टीवेटर / संकर (cultivar / hybrid) के लिए अनुशंसित निर्दिष्ट क्षेत्रों (specified areas recommended for) में या ऑफ-सीजन नर्सरी (off-season nurseries) में आयोजित किया जाएगा (shall be conducted)।
मानक नमूना (Standard sample)
एक कल्टीवेटर (cultivar) का मानक नमूना (नियंत्रण) (standard sample - control) एक आधिकारिक मानक है जिसके विरुद्ध (against which) कल्टीवेटर के बीज (seed of the cultivar) के अन्य सभी नमूनों (all other samples) का न्याय (judged) किया जाएगा।
मानक नमूना किसी भी लक्षण (any character) में महत्वपूर्ण रूप से (significantly) भिन्न नहीं होना चाहिए (must not differ) और मूल संयंत्र प्रजनक / प्रजनन संस्थान (originating plant breeder / breeding institute) से प्राप्त (obtained from) किया जाना चाहिए और इसे नियंत्रित तापमान और आर्द्रता की स्थिति (controlled temperature and humidity conditions) में संग्रहीत (stored) किया जाना चाहिए ताकि हर साल (each year) इसका उपयोग परीक्षण के तहत कल्टीवेटर (cultivars under test) के लिए नियंत्रण भूखंडों को बोने (sow control plots) के लिए किया जा सके। नमूने की अतिरिक्त मात्रा (Further quantities of sample) आवश्यक होने पर (as and when required) मूल संयंत्र प्रजनक (originating plant breeder) से प्राप्त की जानी चाहिए (must be obtained)। एक मानक नमूने (one standard sample) से दूसरे (other) में बदलने से पहले (before changing) मानक नमूने के दो लॉट के बीच (between the two lots) एक तुलना की जानी चाहिए (comparison must be made)।
फसल उगाने की विधि (Method of raising the crop)
विशिष्ट फसल के संबंध में (in respect of the specific crop) मानक और अनुशंसित कृषि / सांस्कृतिक प्रथाओं (recommended agronomic / cultural practices) जैसे कि खेत की तैयारी (field preparation), भूखंड का आकार (size of the plot), पंक्ति की लंबाई (row length), पंक्तियों के बीच की दूरी (distance between the rows), पौधों के बीच की दूरी (distance between the plants), सिंचाई (irrigation) और निषेचन (fertilization), आदि, का पालन विचाराधीन नमूने और उसके नियंत्रण (मानक नमूने) (control - standard sample) दोनों के लिए (both for) किया जाएगा (shall be followed)।
बीज दर को समायोजित करने के लिए (to adjust) विचाराधीन नमूने (sample(s) in question) और मानक नमूने के अंकुरण प्रतिशत को निर्धारित किया जाना चाहिए (must be determined)। बुवाई (sowing) डिबलिंग (dibbling) या छोटे प्लॉट ड्रिल (small plot drill) द्वारा की जानी चाहिए। बीज ड्रिल (Seed drill) की सफाई सुनिश्चित करने के लिए (to ensure its cleanliness) सावधानीपूर्वक जांच की जानी चाहिए (must be carefully checked)। बाद में छंटाई (Subsequent thinnings) की अनुशंसा नहीं की जाती है (is not recommended)। समान कल्टीवेटर (same cultivars) के नमूनों को उत्तराधिकार (succession) में बोया जाना चाहिए (must be sown) और मानक नमूने उपयुक्त अंतराल (suitable intervals) पर बोए जाते हैं (are sown)। (परीक्षण किए जाने वाले प्रत्येक दस नमूनों के लिए एक मानक नमूना - one standard sample for every ten sample to be tested)।
भूखंड का आकार, पंक्ति की लंबाई और रिक्ति (spacing) फसल के अनुसार (according to the crop) भिन्न होगी (shall differ)। उपरोक्त चर (above variables) के लिए अनुशंसित विनिर्देश (Recommended specification) नीचे दी गई तालिका में (in Table mentioned below) प्रदान किए गए हैं (are provided) जिन्हें आवश्यक समझे जाने पर (if considered essential) उपयुक्त रूप से संशोधित किया जा सकता है (can suitably be modified)।
| कुछ महत्वपूर्ण फसलों के लिए अनुशंसित पंक्ति की लंबाई, दूरी, रिक्ति (Recommended row length, distances, spacing for some important crops) | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| क्र.सं. (S.No.) | फसल | पंक्ति की लंबाई (मी) (Row length (m)) | पौधे से पौधे की दूरी (सेमी) (Plant to plant distance (cm)) | पंक्तियों के बीच की जगह (सेमी) (Space between rows (cm)) | भूखंडों के बीच की जगह (सेमी) (Space between plots (cm)) |
| 1. | गेहूं, जौ जई (Wheat, barley oats) | 6 | 2 | 25 | 50 |
| 2. | मटर, लोबिया (Pea, Cowpea) | 6 | 10 | 45 | 90 |
| 3. | चना, हरा चना काला चना (Chickpea, green gram black gram) | 6 | 10 | 30 | 60 |
| 4. | मक्का | 10 | 25 | 60 | 90 |
| 5. | संकर कपास (Hybrid cotton) | 5 | 10 | 45 | 45 |
| 6. | धान: (Paddy:) | ||||
| a) बहुत जल्दी से मध्यम (Very early to medium) | 6 | 15 | 20 | 45 | |
| b) देर से और बहुत देर से (Late and very late) | 6 | 25 | 30 | 60 | |
| 7. | बाजरा (Pearl millet) | 6 | 10 | 60 | 90 |
| 8. | ज्वार | 6 | 10 | 45 | 60 |
खेत के एक हिस्से में विफलता से बचाव के लिए (to guard against failure in one part of the field) और पर्यावरणीय और मिट्टी की उर्वरता विविधताओं (environmental and soil fertility variations) को कम करने के लिए (to reduce) खेत के भूखंडों (field plots) को दो प्रतिकृतियों में उगाया जाना चाहिए (should be grown in two replicates)।
टिप्पणियां लेने के तरीके (Methods for taking observations)
ग्रो-आउट टेस्ट प्लॉट्स (Grow-out test plots) की पूरी बढ़ती अवधि के दौरान (throughout the growing season) फूलों से लेकर पकने तक की अवधि (period from the flowering to ripening) पर जोर देते हुए (with emphasis on) जांच की जानी चाहिए (must be examined)। परीक्षण फसल और नियंत्रण (control) दोनों में कल्टीवेटर (cultivars) के लिए वर्णित विशिष्ट वर्णों (distinguishing characters described) को ध्यान में रखते हुए (keeping in view) सभी पौधों की जांच की जानी चाहिए (All plants must be examined)। अवलोकन लेते समय (While taking the observation), नियंत्रण के विरुद्ध वर्णों में विचलन (deviations in characters against the control) दिखाने वाले पौधों को टैग किया जाना चाहिए (should be tagged) और बाद के चरण में (at a later stage) ध्यानपूर्वक जांच की जानी चाहिए (examined carefully) ताकि यह पुष्टि (to confirm) हो सके कि वे ऑफ-प्रकार (off-types) हैं या नहीं। पाए गए कुल पौधों की संख्या (number of the total plants) और ऑफ-प्रकार के पौधों की संख्या (off-type plants) दर्ज की जानी चाहिए (should be recorded)।
परिणामों की गणना और व्याख्या (Calculation and interpretation of the results)
पाए गए अन्य कल्टीवेटर, प्रजातियों या एबेरेंट (other cultivars, species or aberrants) के प्रतिशत की गणना (percentage ... must be calculated) पहले दशमलव स्थान तक की जानी चाहिए (upto first decimal place)। परिणामों की व्याख्या करते समय (While interpreting the results), तालिका में दिए गए नमूने के आकार (sample size as provided in Table) के संदर्भ में (with reference to) निर्धारित मानकों के लिए अस्वीकार संख्या (reject number for prescribed standards) का उपयोग करके (by using) सहिष्णुता (tolerances) लागू की जानी चाहिए (should be applied)।
| निर्धारित मानकों और नमूने के आकार के लिए अस्वीकार संख्या (Reject number for prescribed standards and sample size) | ||
|---|---|---|
| नमूने के आकार के लिए अस्वीकार संख्या (Reject numbers for sample size of) | ||
| 800 | 400 | |
| 99.5 (200 में 1 - 1 in 200) | 8 | * |
| 99.0 (100 में 1 - 1 in 100) | 16 | 8 |
| 95.0 (100 में 5 - 5 in 100) | 48 | 24 |
| 90.0 (100 में 10 - 10 in 100) | 88 | 44 |
| 85.0 (100 में 15 - 15 in 100) | 128 | 64 |
| * इंगित करता है कि वैध परीक्षण के लिए नमूने का आकार बहुत छोटा है (* indicates that the sample size is too small for a valid test) | ||
परिणामों की रिपोर्टिंग (Reporting of results)
2. वैद्युतकणसंचलन (Electrophoresis)
यह प्रोटीन बैंडिंग और आइसोएंजाइम गतिविधि (protein banding and isoenzyme activity) के आधार पर (based on) कल्टीवेटर की पहचान (cultivar identification) की नवीनतम विधि (latest method) है। यहां एकल बीजों (single seeds) को वसा रहित (defatted) किया जाता है और प्रोटीन और एस्टरेज़ (protein and esterases) के लिए निकाला जाता है (extracted for)। निकाले गए प्रोटीन या एस्टरेज़ (extracted proteins or esterases) को पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (polyacrylamide gel electrophoresis) द्वारा अलग किया जाता है (are separated by)। प्रोटीन और एस्टरेज़ (protein and esterase's) के बैंडिंग प्रतिरूप (banding pattern) के आधार पर किस्मों को विभेदित और पहचाना जा सकता है (varieties can be differentiated and identified)।
प्रोटीन और एंजाइमों के लिए वैद्युतकणसंचलन (Electrophoresis for proteins and enzymes) : फसल के पौधे के बीज, अंकुर (seedlings) या परिपक्व पत्तियों (mature leaves) आदि (etc.) में प्रोटीन का एक विशिष्ट मिश्रण (specific mix of proteins) होता है (have a) जो न केवल फसल विशिष्ट (crop specific) होते हैं बल्कि किस्म विशिष्ट (variety specific) (जीनोटाइप विशिष्ट - genotype specific) भी होते हैं। उपयुक्त माध्यम (suitable medium) में वैद्युतकणसंचलन बीज, अंकुर या परिपक्व पत्तियों से निकाले गए (extracted from) प्रोटीन के मिश्रण (mixture of proteins) को विशिष्ट बैंड (distinct bands) में अलग करता है (separates)। इस प्रकार प्रत्येक किस्म (Each variety) (या जीनोटाइप - genotype) में एक विशिष्ट (specific) "बैंडिंग प्रतिरूप" ("banding pattern") होता है (has a), जिसके आधार पर (on the basis of which) अन्य किस्मों के मिश्रण (admixtures of other varieties), जो "बैंडिंग प्रतिरूप" ("banding pattern") में भिन्न होते हैं (differing in), का पता लगाया जा सकता है (could be detected)। यह (This) विश्लेषण किए गए नमूने (analysed sample) के बैंडिंग प्रतिरूप की तुलना उस किस्म के मानक बैंडिंग प्रतिरूप (standard banding pattern of that variety) से करके (by comparing) किया जाता है (is done)। बीज के नमूनों की आनुवंशिक शुद्धता निर्धारित करने के लिए (for determining) अब वैद्युतकणसंचलन का तेजी से (increasingly) उपयोग किया जा रहा है (is now being used)।
सिद्धांत (Principle) : शब्द 'वैद्युतकणसंचलन' (term 'electrophoresis') एक विद्युत क्षेत्र (electric field) के प्रभाव के तहत (under the influence of) आवेशित कण (charged particle) के प्रवासन (migration) को संदर्भित करता है (refers to)। आयनों की गति (movement of ions) एक उपयुक्त माध्यम में होती है (takes place in), जैसे कि (such as) पॉलीएक्रिलामाइड जेल (polyacrylamide gel), जो आणविक छलनी (molecular sieve) के रूप में कार्य करता है (acts as a) और संवहन धाराओं (convection currents) और प्रसार (diffusion) को कम करता है (cut down), ताकि अलग किए गए घटक (separated components) अधिकतम रिज़ॉल्यूशन (maximum resolution) के साथ तेज क्षेत्रों के रूप में (as sharp zones) बने रहें (remain)। विशिष्ट बैंडों में पृथक्करण (separation into distinct bands) निम्न कारणों से (due to) है,
चूंकि प्रोटीन (Since proteins) अपने आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु (isoelectric point) के अलावा किसी भी पीएच (any pH) पर शुद्ध आवेश (net charge) ले जाते हैं (carry a), वे एक विद्युत क्षेत्र में (in an electric field) पलायन करते हैं (they migrate), जिसकी दर (rate of which) आवेश घनत्व (charge density) (यानी, अणु के द्रव्यमान के आवेश की दर - that is, the rate of charge to mass of the molecule) पर निर्भर करती है (depends on)। अधिक आवेश घनत्व वाले प्रोटीन (Proteins with higher charge density) तेजी से पलायन करेंगे (will migrate faster), इस प्रकार जब विभिन्न प्रोटीनों के मिश्रण (mixture of different proteins) को विद्युत क्षेत्र के अधीन किया जाता है (is subjected to an electric field) तो प्रोटीनों की गति की विभेदक दरें (differential rates of movement of proteins) होती हैं (resulting in)। जेल के छिद्र के आकार (gel pore size) को बदलकर (altering) (विभिन्न सांद्रता पर पॉलिमर का उपयोग करके - using polymers at different concentrations) और प्रोटीन अणु पर आवेश को बदलकर (charge on the protein molecule) (सिस्टम के पीएच को बदलकर - by changing the pH of the system) मिश्रण में प्रोटीन अणुओं के पृथक्करण के लिए (for separation of protein molecules in a mixture) उच्च स्तर का रिज़ॉल्यूशन (high degree of resolution) प्राप्त किया जा सकता है (can be achieved)।
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