A cDNA library is synthesized from mature polyadenylated mRNA and therefore exclusively contains the coding sequences (exons without introns) of active genes expressed in a given tissue. When an organism's genome sequence is unknown, isolating a functional protein-coding gene directly from genomic DNA is hindered by vast non-coding intergenic regions and introns. Furthermore, gene-specific primers cannot be designed without prior sequence data. Thus, screening a cDNA library (e.g., using heterologous probes, antibody screening of expression libraries, or differential display) represents the classical and standard approach to isolate protein-coding genes.
cDNA लाइब्रेरी परिपक्व mRNA (जिसमें केवल कोडिंग एक्सॉन होते हैं और इंट्रॉन अनुपस्थित होते हैं) से रिवर्स ट्रांसक्रिप्टेस द्वारा बनाई जाती है। जब किसी जीव का संपूर्ण जीनोम अनुक्रम ज्ञात न हो, तो जीन-विशिष्ट प्राइमर बनाना संभव नहीं होता। ऐसे में cDNA लाइब्रेरी की स्क्रीनिंग (जैसे हेटेरोलोगस प्रोब या एक्सप्रेशन लाइब्रेरी में एंटीबॉडी द्वारा) प्रोटीन-कोडिंग जीन को पृथक करने का सर्वोत्तम स्रोत है।